第四章 工业微生物产生菌的分离和筛选

　　菌种分离：将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、筛选，进而得到所需要的微生物的过程。

　　菌种的筛选和分离包括两大部分：

　　一、从自然界分离所需要的菌株，

　　二、把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。

　　菌种的分离和筛选一般分为采集、富集、分离、产物鉴别几个步骤。

　　菌株的来源与途径

　　1、从菌种保藏机构或个人购买有关菌种，从中筛选所需菌株。

　　2、从发酵制品中分离筛选目的菌种。

　　3、从自然界中采集样品，如土壤、水、动植物体……，从中分离筛选。

　　菌种采样原则：1、菌种用于生产的目的；2、分布特点；3、生理生化特征。

　　三、对工业微生物的基本要求

　　1、纯种培养，2、稳定的遗传性，3、传代方便，4、生长快、易放大，5、代谢快、易产生目的产物，6、自我保护、环境适应性强，7、产量高、并易与副产物分离。

　　第二节 含微生物样品的富集培养

　　富集培养是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在更适的环境下迅速的生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需的菌株。

　　一、控制培养基的营养成分

　　（1）特定培养基：微生物对于C、N无机盐及微生物等要求有差异，异样型微生物只能利用有机C源，自养型微生物可利用CO2作为C源。

　　（2）若选用直接利用淀粉的糖化菌种可用淀粉作为C源。

　　二、控制培养条件

　　1、PH：细菌、放线菌偏碱（7.0——7.5）；霉菌、酵母菌偏酸（4.5——6.0）。

　　2、温度

　　三、抑制不需要的菌类

　　第三节 微生物的分离

　　一、好氧微生物的分离

　　（一）粗放——菌落纯

　　1、稀释涂布法

　　2、划线分离法（简便、快）

　　3、组织分离法[1、对一般有病组织的分离方法；2、食用菌孢子分离法]

　　（二）细分——菌株纯、细胞纯（复杂）

　　1、利用平皿的生化反应进行分离  [透明圈法、变色圈法、生长圈法、抑菌圈法]

　　2、单细胞或单孢子分离法

　　二、通过控制营养和培养条件进行分离

　　三、厌气菌的分离

　　利用平皿的生化反应进行分离：是一类特殊的分离培养基对大量混杂微生物进行初步分离的方法。培养基是根据目的微生物特殊的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计的。

　　第四节 野生型菌株的筛选和目的产物的鉴别

　　野生型菌株：直接从自然界样品中分离出来的具有一定生产性能的菌株，它是发生突变前的原始菌株。

　　一、初筛——[快速、简便、准确、不漏筛]    

　　1、快速（尽快预测所筛选的目的微生物），

　　2、经济（通过1次筛选得到的具有的广泛目标的微生物）

　　菌种初筛的方法：稀释涂布法、稀释平板法、划线分离法。

　　二、复筛——一个菌株通常要重复3——5个瓶，培养后的发酵液采用精确分析方法测定。

　　摇瓶发酵筛选

　　三、再复筛：取复筛后发酵单位高的。

　　初筛的简化：1、平皿快速检测法；2、从菌体形态变异分析。

　　相关链接：2013年自考《微生物遗传学》考点