第七章 抗性突变株的筛选及特殊性能变异株的筛选

　　第一节 抗性突变株的筛选

　　相对比较容易，只要有10*-6频率的突变体存在，就容易筛选出来。有一次性筛选法和阶梯性筛选法两种手段。

　　一、一次性筛选法

　　指在对出发菌株完全致死的环境中，一次性筛选出少量抗性变异株。噬菌体抗性菌株常用此方法。

　　二、阶梯型筛选法

　　药物抗性即抗药性突变株可在培养基中加入一定量的药物或对菌体生长有抑制作用的物质。

　　1、梯度平板法

　　2、纸片扩散法

　　第二节 抗性噬菌体的选育

　　方法：

　　1、自然诱变  以噬菌体为筛子，敏感菌株的孢子不经任何诱变由其自然突变为抗性菌株。

　　2、诱发突变   敏感菌株先经诱变因素处理，然后将处理过的孢子液分离在含有高浓度的噬菌体的平板上，经诱变后的存活孢子中，如存在抗性变异菌株就能在此平板生长。

　　2、抗噬菌体菌株的选育程序

　　专一性噬菌体的获得和纯化——高效价噬菌体原液制备——菌株诱发突变——分离在含有噬菌体的平皿里挑取抗性菌落和摇瓶培养（加噬菌体）——分离到含噬菌体的平皿上挑取抗性菌落——抗性菌落特征性测试

　　三、抗性噬菌体的特性研究

　　1、抗性菌体稳定性实验

　　2、抗性菌株的产量性能（稳定，不比原始低太多，与原始持平左右）

　　抗性表现：1、细胞结构的改变，防止噬菌体吸附侵入，2、生理代谢改变，噬菌体可以吸附侵入，但不能增殖。    （无论从自然突变或诱发突变所得到的康噬菌体菌株，在用于生产职之前，均需经过反复验证，才能使用。）

　　3、真正抗性与溶源性的区别实验

　　经选育的菌——（诱导）加敏感菌——出现噬菌斑的是假抗，不出现的是真抗。

　　四、用于生产的抗性噬菌体应具备的条件

　　1、产量不低于敏感株；2、不带噬菌体（间接筛选法可以保证原始菌种不带噬菌体）；3、稳定好；4、不是溶源性。    （用过滤器过滤噬菌体和细菌）

　　相关链接：2013年自考《微生物遗传学》考点